小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中γ干擾素(IFN-γ)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的小鼠γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ),再與 HRP標記的γ干擾素(IFN-γ)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠γ干擾素(IFN-γ)濃度。
試劑盒組成
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
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